中国卒中杂志 ›› 2017, Vol. 12 ›› Issue (09): 800-807.DOI: 10.3969/j.issn.1673-5765.2017.09.008
刘磊,王佳伟
摘要:
目的 长单一序列区(unique l ong r egion 8 3,UL83)基因是人巨细胞病毒(human c ytomegalovirus, HCMV)感染再激活标志。本研究拟探索UL83对HCMV感染后人脑血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)中不稳定斑块破裂相关因子,如促血管生成素(angiopoietin,Ang)以及血管内皮生 长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响。 方法 ①采用流式细胞仪确定amidite荧光素(fluorescein amidite,FAM)标记的小干扰核糖核酸(small interfering ribonucleic acid,siRNA)通过脂质体转入人脑VSMC的转染效率;②将3条化学合成siRNA通 过脂质体转染入已感染HCMV AD169株(MOI=10)的人脑VSMC当中,结合空白组、接毒组及接毒无效 干扰组筛选抑制UL83基因最强siRNA;③分别检测HCMV AD169株(MOI=10)感染人脑VSMC后0 h、6 h、 12 h、24 h、48 h以及72 h Ang-1、Ang-2及VEGF-A信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)及蛋 白表达变化;④分别检测空白组、接毒高效干扰组、接毒无效干扰组及接毒组在感染48 h后Ang-1、 Ang-2及VEGF-A的mRNA及感染72 h后上述蛋白表达情况。 结果 转染6 h后,95.59%人脑VSMC转染了FAM标记siRNA。感染HCMV AD169株(MOI=10)的人脑 VSMC在转染siRNA 48 h后,siRNA转染组与接毒组相比,UL83 mRNA相对表达量最多下降78.7%;转染 si RNA72 h后,UL83编码的pp65蛋白相对表达量最多下降81.3%。人脑VSMC感染HCMV AD169株(MOI= 10)0 h、6 h、12 h、24 h、48 h以及72 h时后,Ang-1 mRNA及蛋白相对表达量逐渐下降(P <0.01),Ang-2 及VEGF-A mRNA及蛋白相对表达量则逐渐增加(P <0.01)。而通过转染高效siRNA抑制HCMV AD169株 UL83基因,使得Ang-1表达下降,Ang-2和VEGF-A表达增加均被抑制。 结论 H CMV AD169株具有同时促进人脑VSMC中Ang-1表达降低,Ang-2及VEGF-A表达增加功能。而通 过siRNA抑制HCMV AD169株UL83基因表达能够阻止上述变化。提示HCMV可能通过UL83基因造成靶细 胞产生促血管新生微环境。