中国卒中杂志 ›› 2018, Vol. 13 ›› Issue (10): 1012-1018.DOI: 10.3969/j.issn.1673-5765.2018.10.003
李雪粉,陈文武,李青,郭安臣,王拥军,王群
摘要:
目的 探索在炎性因子作用下,星形胶质细胞的活性变化及其产生的分泌型磷脂酶A 2-ⅡA (secretory phospholipase A2 of group ⅡA,sPLA2-ⅡA)表达量的变化,进一步探讨其可能存在的机制。
方法 在体外原代培养大鼠大脑皮质星形胶质细胞的基础上,取第4代培养的细胞用于实验。随 机分为对照组和实验组,实验组分别为:10 ng/ml白介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)组,100 ng/ml IL-1β组,10 ng/ml 肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)组,100 ng/ml TNF-α组,10 ng/ml IL-1β+10 ng/ml TNF-α组,100 ng/ml IL-1β+100 ng/ml TNF-α组。24 h后用细胞增殖-毒性检测试 剂盒检测细胞活力。选取10 ng/ml IL-1β+10 ng/ml TNF-α组继续进行实验。通过实时荧光定量聚合 酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和酶联免疫吸附测定,检测 sPLA2-ⅡA的表达量变化,并通过qRT-PCR检测核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)、NF-κB 抑制蛋白激酶α(inhibitor of NF-κB kinase α,IKKα)、NF-κB抑制蛋白激酶β(inhibitor of NF-κB kinase β,IKKβ)的mRNA变化。
结果 通过分离、纯化获得了形态典型的大鼠大脑皮质星形胶质细胞,细胞形态不规则,突起较多 较长,呈放射状。胶质纤维酸性蛋白免疫染色显示纯度达95%以上。实验组细胞的活性均高于对照 组。其中,100 ng/ml IL-1β组、100 ng/ml TNF-α组、10 ng/ml IL-1β+10 ng/ml TNF-α组和100 ng/ml IL-1β+100 ng/ml TNF-α组的细胞活性明显高于对照组(t =0.07、0.12、0.53、0.39,P<0.05)。与对照 组相比,10 ng/ml IL-1β+10 ng/ml TNF-α组sPLA2-ⅡA的mRNA和蛋白水平表达量显著升高(t =9.615、 11.635,P<0.05),NF-κB、IKKα、IKKβ的mRNA均增高(t =4.015、4.719、6.509,P<0.05)。
结论 炎性因子IL-1β与TNF-α联合应用可刺激星形胶质细胞活化,并能够不同程度地刺激sPLA2- ⅡA的表达,该过程可能与NF-κB通路有关。