中国卒中杂志 ›› 2022, Vol. 17 ›› Issue (02): 134-141.DOI: 10.3969/j.issn.1673-5765.2022.02.006
刘文倩, 赵顺英, 叶维贞, 姜鸣钰, 陈文涛, 陈青芳, 温少红, 董雯, 刘向荣
摘要:
目的 探讨毛柳苷在缺血性脑损伤后对白介素4诱导蛋白1(interleukin-4 induced protein 1,IL4I1)表 达及小胶质细胞极化的影响。
方法 38只雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(4只)、毛柳苷组(17只)和生理盐水组(17只)。 通过线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注模型(缺血60 min拔栓实现再灌注),再灌注10 min后,毛柳苷 组与生理盐水组小鼠分别经尾静脉按照10 mg/kg剂量注射毛柳苷(1 mg/mL)与生理盐水,每天1次, 持续28 d。ELISA法检测假手术组及模型组缺血再灌注后48 h、7 d、28 d血清中的IL4I1浓度。采用神经 元特异核蛋白(neuronal nuclei,NeuN)抗体免疫荧光染色标记神经元,观察缺血再灌注后7 d脑梗死 体积。采用CD16/32、CD206和离子化钙结合适配分子1(ionized calcium binding adapter molecule 1,Iba1) 免疫荧光染色观察缺血再灌注后7 d小胶质细胞极化状态及突起的长度、数量变化。通过细胞实验 探究IL4I1与小胶质细胞不同表型之间的联系。培养小鼠BV2小胶质细胞,设置M0型细胞为空白对照组, 使用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和INF-γ诱导BV2细胞极化为M1促炎型,使用IL-4和IL-13诱导BV2 细胞极化为M2抗炎型细胞。BV2细胞诱导48 h后提取细胞蛋白,通过免疫印迹检测BV2细胞不同表型 中IL4I1的表达情况。
结果 与假手术组相比,生理盐水组脑缺血再灌注后48 h血清中IL4I1浓度下降(P =0.0302);与生 理盐水组相比,毛柳苷组脑缺血再灌注后7 d和28 d血清中IL4I1浓度增加(P =0.0229,P =0.0076)。毛 柳苷组脑缺血再灌注后7 d脑梗死体积较生理盐水组降低(P =0.0389)。与生理盐水组相比,毛柳 苷组脑缺血再灌注后7 d缺血区周围小胶质细胞突起长度、突起数量、突起的分叉点及终末端点数 量均增加(P =0.0040,P <0.001,P <0.001,P <0.001),皮层与纹状体区域M1型小胶质细胞数量减少 (P =0.0407,P =0.0032),皮层与纹状体区域M2型小胶质细胞数量增多(P =0.0206,P =0.0075)。体外 细胞实验BV2小胶质细胞不同表型中,M1型与M2型较M0型IL4I1表达下降(P =0.0008,P =0.0155),与 M2型相比,M1型IL4I1表达更低(P =0.0406)。
结论 毛柳苷可能通过增加脑缺血再灌注损伤后血清及缺血脑组织中IL4I1的表达,并使激活的小 胶质细胞向M2抗炎表型转化,减少脑梗死体积,从而发挥神经保护作用。