中国卒中杂志 ›› 2022, Vol. 17 ›› Issue (03): 292-300.DOI: 10.3969/j.issn.1673-5765.2022.03.012
马晓晴, 任宇倩, 倪钦帅, 李广文, 郭云良
摘要:
目的 探讨C1q肿瘤坏死因子相关蛋白6(C1q and tumor necrosis factor related protein 6,C1QTNF6) 对大鼠大脑中动脉缺血再灌注(middle cerebral artery occlusion reperfusion,MCAO/R)后血脑屏障及内皮细胞闭合蛋白(occludin)和闭锁小带蛋白-1(zonula occludens 1,ZO-1)表达的影响。
方法 将健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、MCAO/R组、shRNA-C1QTNF6组,造模前两组大鼠通过尾静脉注射生理盐水,shRNA-C1QTNF6组大鼠注射慢病毒载体进而沉默C1QTNF6的信使RNA (messenger RNA,mRNA)水平,注射3 d后各组用改良线栓法建立大鼠MCAO/R模型,缺血2 h,再灌注 24 h。于造模后和再灌注24 h采用改良神经功能缺损评分(modified neurological severity score,mNSS) 法评价各组神经行为功能,TTC染色比较脑梗死体积比值,蛋白质印迹法(western blot,WB)检测梗 死区顶叶半暗带脑组织蛋白C1QTNF6、IL-1β、occludin、ZO-1的表达水平,尼氏染色和苏木精-伊红染色 观察梗死区顶叶半暗带病理损伤变化,荧光Tunel/Neun双染法计数梗死区顶叶半暗带神经元凋亡。
结果 shRNA-C1QTNF6组造模后(10.1±0.6分 vs. 10.7±1.0分,P =0.0003)与再灌注24 h(7.2±0.4 分 v s . 7.9±0.8分,P =0.0001)m N S S均低于M C AO/ R组,脑梗死体积比值(26.32%±5.71% v s . 40.56%±7.74%,P =0.0004)低于M CAO/R组。W B检测结果显示,造模后M CAO/R组脑组 织(0.66±0.06 vs . 0.43±0.05,P =0.0229)C1QTNF6表达高于假手术组;shRNA-C1QTNF6组脑组织 C1QTNF6表达均低于假手术组(0.15±0.03 vs . 0.43±0.05,P =0.0067)和MCAO/R组(0.15±0.03 vs. 0.66±0.06,P =0.0001)。MCAO/R组和shRNA-C1QTNF6组IL-1β表达(0.76±0.07 vs. 0.18±0.04, P =0.0001;0.47±0.07 vs . 0.18±0.04,P =0.0118)均高于假手术组,shRNA-C1QTNF6组IL-1β表 达(0.47±0.07 vs . 0.76±0.07,P =0.0123)低于MCAO/R组。MCAO/R组和shRNA-C1QTNF6组occludin 表达(0.47±0.03 vs . 1.07±0.06,P =0.0001;0.84±0.05 vs . 1.07±0.06,P =0.0124)和ZO -1表 达(0.19±0.02 vs . 0.76±0.03,P =0.0001;0.58±0.04 vs . 0.76±0.03,P =0.0038)均低于假手术 组,shRNA-C1QTNF6组occludin表达(0.84±0.05 vs. 0.47±0.03,P =0.0003)和ZO-1表达(0.58±0.04 vs. 0.19±0.02,P =0.0001)均高于MCAO/R组。尼氏染色显示,shRNA-C1QTNF6组缺血区尼氏小体数量 (361.4±18.3个 vs. 181.6±21.5个,P =0.0001)较MCAO/R组增多,神经元损伤程度更轻。苏木精-伊红 染色显示,shRNA-C1QTNF6组缺血半暗带顶叶皮层病理损伤程度较MCAO/R组有所改善。Tunel/Neun双 染法显示shRNA-C1QTNF6组(19.67±0.88个 vs. 45.00±2.89个,P =0.0002)Tunel/Neun双阳性细胞数 量比MCAO/R组减少,沉默C1QTNF6表达可减少神经元凋亡。
结论 抑制大鼠C1QTNF6表达可能通过下调IL-1β的表达,促进内皮细胞紧密连接蛋白occludin和ZO-1 表达上升,减轻脑血管内皮紧密连接蛋白损伤,发挥对脑缺血再灌注后血脑屏障的保护作用。